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目的

靈長(zhǎng)類獸醫(yī)協(xié)會(huì)(APV，Association of Primate Veterinarians)意識(shí)到在非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物(NHP，Non-human primate)中，腦脊液(CSF，Cerebro-Spinal Fluid)的采集可能對(duì)于臨床和生物醫(yī)學(xué)研究都是必需的。由于這項(xiàng)技術(shù)存在固有風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獸醫(yī)應(yīng)確定腦脊液采集對(duì)臨床評(píng)估的必要性和實(shí)用性。為了生物醫(yī)學(xué)研究目的而進(jìn)行腦脊液采集須在動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)(IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee)或等同的監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)下進(jìn)行。以下建議為IACUC、使用非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型的研究人員以及獸醫(yī)人員提供基本信息，以供在制定腦脊液采集相關(guān)的政策和標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP，Standard Operating Procedure)時(shí)予以考慮。>>>商務(wù)洽談，點(diǎn)此處，在線咨詢

背景

腦脊液分析是一種強(qiáng)大的工具，可加強(qiáng)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)發(fā)生的各種過程的檢測(cè)，例如：出血、炎癥、感染、腫瘤和其他臨床情況。此外，對(duì)腦脊液中化合物(如激素、藥物、神經(jīng)遞質(zhì)、生物標(biāo)志物、代謝產(chǎn)物和病毒)進(jìn)行系列評(píng)估，在基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化研究中同樣非常重要。中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的腦脊液體積可通過腦脊液的分泌和吸收而維持穩(wěn)定。

操作注意事項(xiàng)

腦脊液通常通過腦池或腰椎間隙穿刺采集。其中，通過腰椎穿刺采集腦脊液的并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較低。因?yàn)樵诖蠖鄶?shù)非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物中，腰椎穿刺位點(diǎn)遠(yuǎn)離脊髓的末端。應(yīng)適當(dāng)麻醉動(dòng)物，并使用無菌技術(shù)進(jìn)行操作，包括剃毛等術(shù)部準(zhǔn)備和無菌材料的使用。至少需使用無菌手套、注射器和針頭，還可考慮使用無菌手術(shù)創(chuàng)巾。腦脊液采集通常以側(cè)臥位、胸骨臥位或坐位進(jìn)行，分別通過頸部或脊柱的屈曲來改善對(duì)腦池的進(jìn)入或擴(kuò)大椎間隙(Gereschlager，1987;Magden，2015;Wolf，2012)。選擇的針頭尺寸和長(zhǎng)度應(yīng)適合非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物的種屬和體型(Brady，2000;Cereschlager，1987;Magden，2015;Wolf，2012)。操作時(shí)使用的技術(shù)、設(shè)備和耗材，以及圍手術(shù)期的護(hù)理因動(dòng)物種屬、研究目的和臨床獸醫(yī)的偏好而不同。

有些研究方案可能需隨時(shí)間推移而連續(xù)采集腦脊液，或需采集未麻醉的受試對(duì)象的腦脊液樣本。對(duì)于這些方案，可通過長(zhǎng)期植入的腦脊液穿刺導(dǎo)管從清醒狀態(tài)的恒河猴身上連續(xù)采集腦脊液，而該導(dǎo)管可連接至皮下的采集接入口(Gilberto，2003;Gilberto，2022;MacAllister， 2016)。在編寫本文件時(shí)，作者盡一切努力尋找總腦脊液體積的數(shù)值、硬腦膜穿刺的次數(shù)限制或建議、采集頻率、安全的抽取體積以及腦脊液補(bǔ)充速率相關(guān)的最新參考文獻(xiàn)。對(duì)于大多數(shù)靈長(zhǎng)類動(dòng)物，這方面的文獻(xiàn)很有限。此外，采集方法也各不相同，因?yàn)閺撵`長(zhǎng)類獸醫(yī)協(xié)會(huì)成員收集的調(diào)查結(jié)果表明，各機(jī)構(gòu)均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因此，作者根據(jù)現(xiàn)有的最佳證據(jù)提供了腦脊液采集的考慮因素和建議。

作為參考，先前的研究已確定成年雄性恒河猴(8.0-10.6kg)的表觀腦脊液體積為10+/-0.06 mL，腦脊液流速為0.018+/-0.003 mL/min(McCully，2020)。恒河猴的腦脊液形成速率范圍為28.6-44.2 μL/min(Curran，1970;Lux，1975;Martins，1977)。在這方面需要對(duì)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)一步的研究，以促進(jìn)更具指導(dǎo)性建議的制定。

潛在不良反應(yīng)

雖然在非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物中進(jìn)行腦脊液采集時(shí)報(bào)道的并發(fā)癥很少，但解剖變異以及不適當(dāng)或技術(shù)不佳的操作方法可能導(dǎo)致樣本受損或并發(fā)癥，如出血，腦疝，感染，腦干、脊髓或神經(jīng)根損傷以及動(dòng)物的不適。這些并發(fā)癥雖然罕見，但可能會(huì)損害動(dòng)物福利。

由于存在風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)由獸醫(yī)或經(jīng)過培訓(xùn)的獸醫(yī)人員采集腦脊液。對(duì)于未成功的腦脊液采集嘗試，實(shí)踐可能有所不同。常見做法是允許一個(gè)人進(jìn)行最多三次未成功的嘗試。在第三次嘗試失敗后，應(yīng)由另一位合格的人員接替。如果第二個(gè)人在三次嘗試后仍無法采集到腦脊液，則停止嘗試。同時(shí)動(dòng)物將接受適當(dāng)?shù)逆?zhèn)痛治療，并從麻醉中恢復(fù)。在嘗試失敗后更換采集部位(例如從腦池到腰椎)通常可成功。如果是未進(jìn)行成像的失敗嘗試，則可使用X線透視輔助穿刺針放置。除提高成功率外，影像引導(dǎo)還可降低創(chuàng)傷性穿刺的發(fā)生率。(Eskey，2001)

術(shù)后監(jiān)測(cè)應(yīng)持續(xù)進(jìn)行，直到動(dòng)物返回其籠內(nèi)，并能在沒有支撐的情況下保持直立姿勢(shì)。對(duì)動(dòng)物的監(jiān)測(cè)應(yīng)該至少持續(xù)24小時(shí)或根據(jù)IACUC批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。監(jiān)測(cè)應(yīng)包括對(duì)基本的生理、行為和運(yùn)動(dòng)參數(shù)的評(píng)估。尤其應(yīng)評(píng)估動(dòng)物是否出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙的跡象，包括但不限于嗜睡、抑郁、昏迷和頭部壓迫感等。在人類醫(yī)學(xué)中，腦脊液采集后出現(xiàn)的頭痛和由此引起的顱內(nèi)低壓并不少見。考慮到非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物中的這種潛在后遺癥，應(yīng)在手術(shù)時(shí)給予鎮(zhèn)痛治療，并延長(zhǎng)2-3天，或根據(jù)與頭痛或脊柱疼痛相關(guān)行為的術(shù)后觀察結(jié)果按需提供鎮(zhèn)痛治療。最有效的鎮(zhèn)痛方案可能是術(shù)前即開始綜合治療。

IACUC注意事項(xiàng)和記錄保存

IACUC應(yīng)了解腦脊液采集的相關(guān)工作以及所有可能的并發(fā)癥，并至少每年對(duì)其審查。所有相關(guān)信息，如藥物劑量、術(shù)前準(zhǔn)備、采集的腦脊液體積、采集頻率以及術(shù)后短期和長(zhǎng)期恢復(fù)情況，均應(yīng)在IACUC方案中進(jìn)行描述，并在醫(yī)療記錄或?qū)嶒?yàn)室日志中適當(dāng)?shù)赜涗洝ＤX脊液可能是研究方案中的關(guān)鍵資料，但如果采集技術(shù)不恰當(dāng)，可能會(huì)對(duì)動(dòng)物福利產(chǎn)生影響。遞交方案時(shí)，應(yīng)提供采集次數(shù)和頻率的科學(xué)依據(jù)。

具體而言，IACUC還應(yīng)仔細(xì)評(píng)估涉及腦脊液采集的每個(gè)提案，并考慮以下問題：

1.腦脊液采集是否對(duì)實(shí)現(xiàn)方案中所述的科學(xué)目標(biāo)至關(guān)重要?

2.是否有替代方法和侵入性較小的中樞神經(jīng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)方法(如成像技術(shù))可供選擇，如果有，是否考慮過?

3.操作人員是否接受過適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)并具備足夠的技能?

4.是否將提供適當(dāng)?shù)膰中g(shù)期麻醉和鎮(zhèn)痛方案?有關(guān)麻醉和鎮(zhèn)痛計(jì)劃，應(yīng)咨詢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獸醫(yī)。

5.采集的腦脊液體積是否符合動(dòng)物的年齡和體型考慮?

6.腦膜穿刺的次數(shù)和頻率是否適合動(dòng)物，以及并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)是否已降到最低?如果多次采集腦脊液為研究的一部分，應(yīng)明確規(guī)定每只動(dòng)物的最大采集次數(shù)。

7.術(shù)后監(jiān)測(cè)計(jì)劃是否適當(dāng)?

8.是否考慮了所有可能的術(shù)后并發(fā)癥，并列出了所有合理的干預(yù)方法，包括安樂死?

來源：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物那些事兒公眾號(hào)

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